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逆转录RNA大与50ng/ul会怎样样?

2015-11-28手艺材料

逆转录的时辰系统请求RNA的Zui大批是 50ng/ul ,大于这个数会有甚么样的效果???

在做逆转录的时辰系统请求RNA的Zui大批是 50ng/ul ,可是插手的量却远弘远于这个数。我想知道,若是是大于这个量是否是系统就不能逆转了?仍是跨越这个Zui大限量,它也只是按50ng/ul停止逆转录?????
 
跨越这个量,起首是反转录酶的才能无限,不能全数RNA都反转录,若是用来做定量,成果会不精确(不能保障你须要的特定RNA全数被反转录了)。其次,若是插手的体积过大,提取RNA时残留的一些试剂能够会影响酶活气。
不知道你的cDNA筹算拿来做甚么,若是是做PCR,那其实没须要加适量的RNA啊。
 

不知道你要来干甚么。我普通为了省试剂都把这个系统减半了。

 
我是用来做及时荧光定量PCR(QRT-PCR)的。另有想就教妙手,我的PCR成果与Western Bolting成果相反。您碰到过如许的题目吗?感谢!

不知道你要来干甚么。我普通为了省试剂都把这个系统减半了。
浓缩的时辰算错了。使得插手的剂量远弘远于现实剂量。我之前也是用给定的系统逆转录。获得的cDNA我普通会浓缩10倍以后再用。想叨教一下,我浓缩10倍以后会引发成果逆转吗!??

我没碰到这个题目,由于我没做过
不过培训qPCR时,公司的人有说过,偶然辰会有这类环境,不过详细的我记不得了,不美意思啦。
 
逆转录进程
 
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